วิธีทางจุลชีววิทยาสำหรับการศึกษาของน้ำดินและอากาศ

มีชีวิตขนาดเล็ก - เล็ก ๆ สิ่งมีชีวิตส่วนใหญ่เซลล์เดียวซึ่งเป็นที่แพร่หลายในธรรมชาติ พวกเขาจะพบได้ในทุกสื่อ (อากาศดินน้ำ) ในมนุษย์และสัตว์ในพืช

ความหลากหลายคุณภาพและจำนวนของสิ่งมีชีวิตขึ้นอยู่กับหลักสารประกอบทางโภชนาการ แต่ก็ยังเป็นสิ่งที่สำคัญเป็นความชื้นอุณหภูมิอากาศและการกระทำของแสงแดดและปัจจัยอื่น ๆ

природных сред позволяют выявить наличие патогенных микроорганизмов, определить их количество и, в соответствии с полученными результатами, выработать меры по устранению или предупреждению инфекционных заболеваний. วิธีการในการศึกษาสุขอนามัยและจุลชีววิทยาสื่อธรรมชาติสามารถตรวจสอบสถานะของเชื้อโรคและเพื่อกำหนดจำนวนของพวกเขาสอดคล้องกับผลที่ได้รับในการพัฒนามาตรการที่จะลบหรือป้องกันโรคติดเชื้อ นอกจากนี้บัญชีเชิงปริมาณเป็นสิ่งจำเป็นสำหรับการสร้างแบบจำลองระบบนิเวศและการพัฒนาของกระบวนการทางธรรมชาติของการกำกับดูแล . ขอให้เราพิจารณาต่อไปสิ่งที่เป็นวิธีการของการตรวจสอบทางจุลชีววิทยา

ดิน

มันได้รับการยกย่องจากนักวิชาการว่าเป็นหนึ่งในเส้นทางที่เป็นไปได้ของการส่งผ่านของโรคติดเชื้อ ด้วยการหลั่งมนุษย์หรือสัตว์ป่วยในโรคพืชในดินเจาะ บางส่วนของพวกเขาโดยเฉพาะอย่างยิ่งสปอร์สามารถยังคงมีอยู่ในดินเป็นเวลานาน (บางครั้งมานานหลายทศวรรษ) позволяют определить "микробное число" (кол-во микроорганизмов в грамме грунта), а также коли-индекс (количество кишечных палочек). ดินล่มสลายเชื้อโรคการติดเชื้อที่เป็นอันตรายเช่นเช่นบาดทะยักโรคระบาดโรคและอื่น ๆ . วิธีการศึกษาสุขาภิบาลจุลชีววิทยาของดินช่วยให้คุณสามารถกำหนด "นับจุลินทรีย์" (จำนวนของจุลินทรีย์ในดินกรัมที่) และดัชนี coli (จำนวนเชื้อ E. coli) ใน .

การวิเคราะห์ดิน: ภาพรวม

следует в первую очередь отнести прямое микроскопирование и посев на плотную питательную среду. วิธีการในการตรวจสอบทางจุลชีววิทยาของดินควรนำมาประกอบเป็นหลักกล้องจุลทรรศน์โดยตรงและวัฒนธรรมที่เป็นของแข็ง กลางสารอาหาร ประชากรของจุลินทรีย์และกลุ่มของพวกเขาที่อาศัยอยู่ในดินที่แตกต่างกันเกี่ยวกับสถานะการจัดหมวดหมู่และการทำงานของระบบนิเวศ ในสาขาวิทยาศาสตร์ที่พวกเขาเป็นปึกแผ่นภายใต้ทั่วไปคำว่า "สิ่งมีชีวิตในดิน." ไพรเมอร์ - ที่อยู่อาศัยจำนวนมากของจุลินทรีย์ ในกรัมของดินที่เป็นปัจจุบัน 1-10 พันล้านเซลล์ของพวกเขา ในสภาพแวดล้อมนี้อย่างแข็งขันใช้เวลาย่อยสลายสารอินทรีย์ที่มีส่วนร่วมของจุลินทรีย์ saprophytic ต่างๆ

การศึกษาด้วยกล้องจุลทรรศน์ของวิธีทางจุลชีววิทยา: ขั้นตอน

การวิเคราะห์ของกลางเริ่มต้นด้วยการสุ่มตัวอย่าง เพื่อจุดประสงค์นี้ปอกเปลือกก่อนหน้านี้และมีดขูดเครื่องดื่มแอลกอฮอล์ (จอบสามารถนำมาใช้) หลังจากนั้นเตรียมตัว ขั้นตอนต่อไป - นับรอยเปื้อนเซลล์ย้อมสี พิจารณาแยกแต่ละขั้นตอน

การสุ่มตัวอย่าง

ในการวิเคราะห์ดินเกษตรมีแนวโน้มที่กลุ่มตัวอย่างที่นำมาจากความลึกของชั้นทั้งหมด ลบออกก่อน 2-3 ซม. เหนือพื้นดินในขณะที่มันอาจจะอยู่ในจุลินทรีย์ภายนอก หลังจากนั้นเป็นต้นมามีพื้นที่ศึกษาพื้นดินใช้เสาหิน ความยาวของแต่ละของพวกเขาจะต้องสอดคล้องกับความหนาของชั้นที่ที่คุณต้องการที่จะลิ้มลอง

พล็อตของ 100-200 ตาราง 7-10 เมตรตัวอย่างที่เลือก น้ำหนักของแต่ละคน - คำสั่งของ 0.5 กิโลกรัม กลุ่มตัวอย่างจะต้องผสมในถุง จากนั้นนำตัวอย่างเฉลี่ยชั่งน้ำหนักประมาณ 1 กิโลกรัม มันควรจะวางไว้ในกระดาษ (หมัน) แพคเกจใส่ไว้ในถุงผ้า ก่อนที่จะมีการวิเคราะห์ตัวอย่างที่เก็บไว้ในตู้เย็นโดยตรง

การเตรียมการสำรวจ

ดินกวนเทลงบนแก้วแห้ง ใช้ก่อนเช็ดด้วยแอลกอฮอล์และการเผาไหม้ด้านบนเตา ด้วยดินไม้พายผสมและขยายอย่างเท่าเทียมกัน มันเป็นข้อบังคับที่จะเอารากและองค์ประกอบต่างประเทศอื่น ๆ การทำเช่นนี้จะใช้แหนบ ก่อนที่จะดำเนินการและแหนบไม้พายเหนือเตาติดไฟและได้รับอนุญาตให้เย็น

ของแปลงดินต่างๆกระจายบนกระจกที่เลือกส่วนเล็ก ๆ พวกเขาชั่งน้ำหนักในจานพอร์ซเลนในระดับทางเทคนิค является специальная обработка образца. ขั้นตอนวิธีการบังคับกล้องจุลทรรศน์ของการศึกษาทางจุลชีววิทยาคือการประมวลผลพิเศษของกลุ่มตัวอย่าง 2 ต้องเตรียมล่วงหน้าขวดผ่านการฆ่าเชื้อ ขนาดของพวกเขาไม่ควรเกิน 250 มล. หนึ่งในขวดเทลงใน 100 มล. น้ำประปา เพราะมันใช้เวลา 0.4-0.8 มลตัวอย่างของเหลวของดินและชุบเพื่อวาง ส่วนผสมที่ควรได้รับการลูบด้วยนิ้วหรือยางสากเป็นเวลา 5 นาที

น้ำจากขวดแรกถูกย้ายลงไปในดินมวลกระติกน้ำที่ว่างเปล่า นอกจากนี้เธอกลับมาถู หลังจากมวลนี้จะถูกโอนไปขวดใกล้เปลวไฟเตา ภาชนะที่มีการระงับดินถูกเขย่าบนเครื่องปั่นเป็นเวลา 5 นาที หลังจากนั้นมันก็รับอนุญาตให้ตั้งประมาณ 30 วินาที นี้เป็นสิ่งจำเป็นเพื่อให้อนุภาคขนาดใหญ่ที่จะชำระ หลังจากครึ่งมวลนาทีจะใช้สำหรับการเตรียมความพร้อมการเตรียมการ

จำนวนเซลล์บนรอยเปื้อนคงที่

, разработанному Виноградским. การศึกษาด้วยกล้องจุลทรรศน์โดยตรงของดินจะดำเนินการโดยวิธีการของการศึกษาทางจุลชีววิทยาการพัฒนา Vinogradskii ในปริมาณที่แน่นอนของการระงับการนับจำนวนของเซลล์ของจุลินทรีย์ การศึกษารอยเปื้อนคงสามารถเก็บยาเสพติดในระยะยาวและการดำเนินการคำนวณในเวลาใดก็ได้

การเตรียมความพร้อมของยาเสพติดดังต่อไปนี้ จำนวนหนึ่งของสารละลาย (ปกติ 0.02-0.05 ml) ถูกนำไปใช้กับไมโครลงบนสไลด์ การแก้ปัญหานี้ได้รับการเพิ่มการลดลงของวุ้น (polysaccharide agaropectin ส่วนผสมและสารสกัดจาก agarose สีน้ำตาลและสีแดงสาหร่ายทะเลสีดำ) ที่ขยับขึ้นอย่างรวดเร็วและแผ่กระจายไปทั่วพื้นที่ 4-6 ตาราง ซม. Pap อากาศแห้งและคงที่สำหรับ 20-30 นาที เครื่องดื่มแอลกอฮอล์ (96%) ถัดไปยาเสพติดชุบด้วยน้ำกลั่นและวางไว้ใน P-P คาร์บอลิก Erythrosine 20-30 นาที

หลังจากการย้อมสีก็จะถูกล้างและแห้งในอากาศ จำนวนเซลล์ดำเนินการจากการแช่เลนส์

หว่านเมล็ดบนสื่อที่เป็นของแข็ง

позволяют выявить большое количество микроорганизмов. วิธีกล้องจุลทรรศน์สำหรับการตรวจสอบทางจุลชีววิทยาสามารถตรวจสอบจำนวนมากของเชื้อจุลินทรีย์ แต่แม้จะมี นี้วิธีการ ฉีดวัคซีนที่พบมากที่สุดในทางปฏิบัติ สาระสำคัญของมันประกอบด้วยจำนวนเพาะของยาเสพติด (Suspension ดิน) ในจานเลี้ยงเชื้อในอาหารแข็ง

позволяет учитывать не только количество, но и групповой, а в ряде случаев и видовой состав микроскопической флоры. วิธีการของการวิจัยทางจุลชีววิทยานี้จะคำนึงถึงไม่เพียง แต่ปริมาณ แต่ยังกลุ่มและในบางกรณีและองค์ประกอบของสายพันธุ์ของพืชด้วยกล้องจุลทรรศน์ นับจำนวนของอาณานิคมผลิตมักจะมาจากด้านล่างของจานเลี้ยงเชื้อในที่มีแสงที่ส่ง บนเนื้อที่คำนวณวางเครื่องหมายหรือปริมาณน้ำหมึก

การวิเคราะห์น้ำ

จุลินทรีย์ในร่างกายของน้ำที่เป็นกฎที่สะท้อนให้เห็นถึงองค์ประกอบของจุลินทรีย์ดินรอบ ๆ имеют особое практическое значение при изучении состояния конкретной экосистемы. ในบริบทนี้วิธีการวิเคราะห์สุขาภิบาลจุลชีววิทยาของน้ำและดินที่มีความสำคัญในทางปฏิบัติโดยเฉพาะอย่างยิ่งในการศึกษาของรัฐของระบบนิเวศโดยเฉพาะอย่างยิ่ง น้ำจืดที่มีเป็นกฎ, cocci แบคทีเรียรูปแท่ง

anaerobes ในน้ำพบในปริมาณที่น้อย เป็นกฎที่พวกเขาคูณที่ด้านล่างของร่างกายของน้ำในโคลนการมีส่วนร่วมในกระบวนการของการทำให้บริสุทธิ์ มหาสมุทรและทะเลจุลินทรีย์ตัวแทนกอบ halophytic แบคทีเรีย (ชอบเกลือ)

ในน้ำบ่อบาดาลเป็นจริงไม่มีจุลินทรีย์ เพราะนี่คือความสามารถในการกรองของชั้นดิน

считаются определение микробного числа и коли-титра либо коли-индекса. วิธีการทั่วไปของการวิจัยทางจุลชีววิทยาของน้ำการพิจารณาความหมายของจุลินทรีย์และ coli-titer หรือถ้าดัชนี ตัวบ่งชี้แรกกำหนดจำนวนแบคทีเรียใน 1 มิลลิลิตรของเหลว ดัชนี coli หมายถึงจำนวนของโคลิฟอร์มในปัจจุบันลิตรของน้ำและถ้า titer - จำนวนขั้นต่ำหรือของเหลวเจือจางสูงสุดที่พวกเขายังสามารถตรวจพบ

การกำหนดจำนวนของจุลินทรีย์

วิธีการนี้จะตรวจสอบทางจุลชีววิทยาสุขาภิบาลน้ำเป็นดังนี้ ใน 1 มิลลิลิตรของน้ำจะถูกกำหนดจำนวน anaerobes mesophilic และตามอำเภอใจ (กลาง) aerobes สามารถในเนื้อเปปโตนวุ้น (สื่อหลัก) ที่ 37 องศา ในระหว่างวันที่ในรูปแบบอาณานิคมมองเห็นได้ในการขยาย 2-5, P หรือได้ด้วยตาเปล่า

является посев. ขั้นตอนที่สำคัญของวิธีการวิเคราะห์ทางจุลชีววิทยาของน้ำที่หว่านลง เพราะแต่ละตัวอย่างที่หว่านลงอย่างน้อย 2 ปริมาณที่แตกต่างกัน เมื่อวิเคราะห์น้ำประปาในแต่ละถ้วยที่ทำจาก 1-0.1 มล. ของของเหลวบริสุทธิ์และการปนเปื้อน 0.01-0.001 มล. สำหรับการฉีดวัคซีน 0.1 มล. หรือไดรฟ์ขนาดเล็กของของเหลวจะถูกเจือจางด้วยน้ำกลั่น (หมัน) น้ำ อย่างต่อเนื่องเตรียมเจือจางทศนิยม 1 มิลลิลิตรของแต่ละของพวกเขาจะทำในสองจานเพาะเชื้อ

การปรับปรุงพันธุ์ที่เต็มไปด้วยอาหารเลี้ยงเชื้อ มันเป็นครั้งแรกจะต้องละลายและเย็นถึง 45 องศา หลังจากกวนกลางที่ใช้งานที่เหลืออยู่บนพื้นผิวแนวนอนสำหรับการแข็งตัว ที่ 37 องศา พืชที่ปลูกได้ตลอดทั้งวัน позволяет учитывать результаты на тех чашках, где количество колоний находится в пределах от 30 до 300. วิธีการพิจารณาของการวิจัยทางจุลชีววิทยาของน้ำจะเข้าสู่บัญชีผลของอาหารเหล่านั้นซึ่งมีจำนวนอาณานิคมในช่วง 30-300 ที่

อากาศ

ก็ถือว่าเป็นพื้นดินการขนส่งสำหรับจุลินทรีย์ являются седиментация (оседание) и аспирация. วิธีการหลักของการศึกษาทางจุลชีววิทยามีการตกตะกอนอากาศ (ตกตะกอน) และความทะเยอทะยาน

สภาพแวดล้อมอากาศจุลินทรีย์จะถูกแบ่งออกโดยพลการเข้าผันแปรและคงที่ กลุ่มแรกประกอบด้วยยีสต์ cocci chromogenic สปอร์แบกบาซิลลัส coli และจุลินทรีย์อื่น ๆ ที่มีความทนทานต่อการอบแห้งสัมผัสกับแสง ผู้แทนราษฎรจุลินทรีย์ตัวแปรเจาะเข้าไปในอากาศจากถิ่นที่อยู่ปกติของพวกเขาในระยะยาวยังคงมีพลังของพวกเขา

ในอากาศของเมืองใหญ่จุลินทรีย์มากขึ้นกว่าในสภาพแวดล้อมที่อากาศในพื้นที่ชนบท มากกว่าทะเลป่าแบคทีเรียน้อยมาก ฟอกอากาศอำนวยความสะดวกในการเร่งรัด: หิมะและฝนตก จุลินทรีย์ในบ้านมากขึ้นกว่าในพื้นที่เปิดโล่ง จำนวนของพวกเขาจะเพิ่มขึ้นในช่วงฤดูหนาวในกรณีที่ไม่มีการระบายอากาศปกติ

การตกตะกอน

считается простейшим. วิธีการของการวิจัยทางจุลชีววิทยาจุลชีววิทยานี้จะถือเป็นที่ง่ายที่สุด มันขึ้นอยู่กับการตกตะกอนของละอองและอนุภาคบนพื้นผิววุ้นในจานทดลองเปิดภายใต้แรงโน้มถ่วง วิธีการตกตะกอนอาจจะไม่ถูกต้องตรวจสอบจำนวนแบคทีเรียในอากาศ ความจริงก็คือว่าในถ้วยเปิดให้จับส่วนที่ดีของอนุภาคฝุ่นและละอองแบคทีเรียค่อนข้างยาก บนพื้นผิวที่สะสมอนุภาคขนาดใหญ่ส่วนใหญ่

วิธีการนี้จะไม่ได้ใช้สำหรับการวิเคราะห์ทางอากาศ สภาพแวดล้อมนี้โดดเด่นด้วยความผันผวนมากในความเร็วของการไหลของอากาศ ตกตะกอนอาจ แต่ถูกนำมาใช้ในกรณีที่ไม่มีอุปกรณ์ที่มีความซับซ้อนมากขึ้นหรือแหล่งพลังงานไฟฟ้า

กำหนดจำนวนของจุลินทรีย์ที่ดำเนินการโดยวิธีการ Omelyansky ตามนั้นสำหรับ 5 นาทีบนพื้นที่ผิวของ 100 ตารางวุ้น ซม. settles จำนวนของเชื้อแบคทีเรียที่มีอยู่ใน 10 ลิตรของอากาศ

สั่งซื้อ 535 "ในการรวมกันของวิธีทางจุลชีววิทยาของการสืบสวน"

การวิเคราะห์แบคทีเรียตรงบริเวณสถานที่สำคัญในการทำกิจกรรมทางคลินิกและทางห้องปฏิบัติการที่ซับซ้อนมุ่งเป้าไปที่การวินิจฉัยการป้องกันและการรักษาโรคติดเชื้อต่างๆ อย่างไรก็ตามการศึกษาของสภาพแวดล้อมที่พวกเขาจะไม่ จำกัด

ที่มีความสำคัญโดยเฉพาะอย่างยิ่งคือการวิเคราะห์แบคทีเรียของวัสดุชีวภาพในโรงพยาบาล สำหรับการวิจัยดำเนินการในสถานบริการสาธารณสุขความต้องการที่เพิ่มขึ้น วัตถุประสงค์ของการสั่งซื้อ "ในการรวมกันของวิธีทางจุลชีววิทยาของการสืบสวน" คือการปรับปรุงการวิเคราะห์แบคทีเรีย, การปรับปรุงคุณภาพและประสิทธิภาพของการวินิจฉัยทางจุลชีววิทยา

ตรวจด้วยกล้องจุลทรรศน์รอยเปื้อนในผู้หญิง

มันเป็นวิธีที่สำคัญของการวิเคราะห์สำหรับการวินิจฉัยการติดเชื้อ, การติดเชื้อติดต่อทางเพศสัมพันธ์และการติดเชื้อฉวยโอกาส (แบคทีเรียฉวยโอกาส)

การวิเคราะห์ด้วยกล้องจุลทรรศน์เพื่อประเมินองค์ประกอบเชิงคุณภาพและเชิงปริมาณของจุลินทรีย์ที่ตรวจสอบความถูกต้องของการสุ่มตัวอย่าง ยกตัวอย่างเช่นการปรากฏตัวของเยื่อบุผิวในช่องคลอดใน swabs นำมาจากคลองปากมดลูกที่บ่งชี้การละเมิดกฎของการเลือกของตัวอย่างทางชีวภาพที่

ว่ากันว่าการตรวจสอบทางจุลชีววิทยาในกรณีนี้จะตามด้วยปัญหาบางอย่างโดยทั่วไป พวกเขาจะเกี่ยวข้องกับความจริงที่ว่าในระบบสืบพันธุ์เพศที่ลดลงเป็นปกตินำเสนอจุลินทรีย์ที่มีความหลากหลายแตกต่างกันไปในทุกเพศทุกวัยที่แตกต่างกัน เพื่อปรับปรุงประสิทธิภาพของการวิจัยและได้มีการพัฒนากฎระเบียบมาตรฐาน

การตรวจวินิจฉัยการติดเชื้อไวรัส

มันจะดำเนินการโดยวิธีการตรวจสอบดีเอ็นเออาร์เอ็นเอและเชื้อโรค พวกเขาจะขึ้นอยู่กับการตัดสินใจของลำดับเบสในวัสดุทางพยาธิวิทยา เพื่อจุดประสงค์นี้ฟิวส์โมเลกุล พวกเขามีการผลิตเทียมกรดนิวคลีอิกเสริม (เสริม) กรดไวรัสที่มีป้ายกำกับฉลากของสารกัมมันตรังสีหรือไบโอติน

ความไม่ชอบมาพากลของวิธีการที่จะถูกทำซ้ำคัดลอกชิ้นดีเอ็นเอที่เฉพาะเจาะจงที่มีเพียงไม่กี่ร้อยของ (หรือนับ) เบื่อหน่ายคู่ การจำลองแบบ (คัดลอก) เป็นส่วนขยายที่อาจเริ่มต้นเพียง แต่ในบางหน่วย ไพรเมอร์ (ไพรเมอร์) ที่ใช้ในการสร้างพวกเขา พวกเขามีการสังเคราะห์ oligonucleotides

PCR วินิจฉัย (โพลิเมอร์ปฏิกิริยาลูกโซ่) เป็นเรื่องง่ายในการดำเนินการ วิธีการนี้จะช่วยให้คุณได้อย่างรวดเร็วได้รับผลโดยใช้จำนวนเงินขนาดเล็กของวัสดุทางพยาธิวิทยา โดยใช้วิธี PCR วินิจฉัยระบุเฉียบพลันเรื้อรังและแฝง (ซ่อนไว้) การติดเชื้อ

เมื่อความไวของวิธีการนี้ถือว่าเป็นที่นิยมมากขึ้น อย่างไรก็ตามการทดสอบระบบในปัจจุบันจะไม่น่าเชื่อถือเพียงพอดังนั้นการวินิจฉัย PCR ไม่สามารถแทนที่วิธีการแบบดั้งเดิม